Ga je mee op vakantie met Juf Roos? In haar tweede bioscoopfilm gaat de populaire juf! - bekend uit de gelijknamige RTL4 serie - samen met haar buurjongen Gijs op zoek naar de kleuren van de regenboog. Uiteraard zit de film opnieuw vol vrolijke, bekende kinderliedjes. Juf Roos en Gijs gaan op vakantie en daar hebben ze superveel zin in. De lunchpakketjes zijn gemaakt, de koffers gepakt … de reis kan beginnen! Maar dan gaat er iets mis. Gijs slaat per ongeluk de rode roos van de jurk van de juf waardoor die haar magie verliest. Een groot probleem want met de bijzondere jurk konden ze overal naartoe reizen en nu gaat dat niet meer. In de kist van Oma Rosalinde vinden Juf Roos en Gijs gelukkig een oplossing. Als ze alle kleuren van de regenboog verzamelen, kunnen ze de jurk weer maken. Het blijkt nog een behoorlijke zoektocht om de juiste kleuren te vinden, maar wel een hele leuke!